外植体建立
取材:选取生长健壮、无病虫害的植株,取材前先在无菌室内培养2-3天,不浇水,以减少植株所带杂菌。
消毒:取金线兰幼嫩茎段,去叶,自来水冲洗干净,用75%的酒精灭菌5秒,再用0.1%升汞灭菌10分钟,无菌水冲洗5-6次。
接种:将消毒好的材料在超净工作台上切成带2-3个腋芽的茎段,接在诱导培养基上。诱导培养基为1/2MS+6-BA6毫克/升+NAA0.6毫克/升+蔗糖2%+琼脂0.8%,pH5.4,培养室温度26±1℃。
继代培养
外植体接种后20天开始萌动,继续培养30天,腋芽增殖为丛生芽。以后每35-40天转接一次,增殖系数可达3.0以上。增殖用培养基为1/2MS+6-BA5毫克/升+NAA0.5毫克/升+蔗糖2%+琼脂0.8%。
壮苗培养
经过多次继代的芽苗较细小,须经过壮苗培养。壮苗用的培养基为MS大量元素减半的基本培养基,不加任何激素,培养30-40天,苗高23厘米时便可转入促根培养。
促根培养
在继代培养过程中有部分的苗会生根但大部分的苗须经过促根培养诱导生根。促根培养基用1/2MS+NAA2毫克/升+IBA1毫克/升+蔗糖2%+琼脂0.8%+活性炭0.3%,培养40天左右长出1-2条肉质根。
移栽育苗
将促根后的苗连同培养瓶搬到阴凉通风处,经过10-15天的适应性炼苗,便可洗苗移栽。